临床输血

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注意观察比较不同浓度红细胞悬液的颜色和密度！也可根据经验使用3%或者4%的商品化试剂红细胞的颜色和细胞扣的大小来做标准对照。

问：为什么试管法血清学试验需要洗涤患者红细胞？

粘附在红细胞表面的血清（浆）中的血型物质（可溶性抗原）等会中和试剂抗体，造成凝集减弱或呈假阴性，影响红细胞ABO血型抗原的检测；粘附在红细胞表面的冷自身抗体等可使血型检测及直抗试验出现假阳性；粘附在红细胞上的抗体或其他球蛋白会中和抗球蛋白试剂，造成直抗试验凝集减弱或呈假阴性。红细胞洗涤过程可除去粘附在红细胞上的抗体、蛋白成分以及可溶性抗原，故试管法血清学试验需洗涤患者红细胞。

问：为什么微柱凝胶法通常不需要洗细胞？

微柱凝胶免疫分析技术中微柱内的介质起到分子筛的作用，在一定离心力的作用下，分子筛的孔径只允许游离红细胞通过，聚集在微柱底部，即为阴性反应；凝集的红细胞因体积大于分子筛孔径而被阻滞，不能通过微柱介质层，滞留于微柱介质的顶部或介质的中间，即为阳性反应。示意图如下：

红细胞沉降需要的离心力通常小于100 g，而抗体等蛋白质复合物分子沉降分离需要的离心力至少是3000g。微柱凝胶卡离心机离心时，离心力通常小于300g，可使微柱凝胶孔反应腔中的红细胞下降分离到反应柱中，而血清蛋白、球蛋白以及可溶性抗原抗体复合物等则不会跟随红细胞一起到达反应柱中，由此就达到了分离红细胞和血清中的抗体蛋白质复合物的效果，所以通常就不需要洗涤红细胞。

（伯乐离心力为85g；博迅为两档离心，离心力分别为66g和183g；奥森多为两档离心，离心力分别为55g和199g。）

微柱凝胶法相关知识背景

1984年，Jean Adam和Yves Lapierre首先发明了微柱凝胶检测法，于1986年申请并获得发明专利。

1988年，发明者瑞士达亚美（DiaMed）公司首先推广微柱凝胶法（卡式），并在ISBT大会上展出，在此届大会上引起轰动。自此，血型检测领域属于血型凝胶卡的时代到来了。

1996年 AABB 出版的《输血科技术 手册》（第 12 版）将微柱凝胶血型检测列入红细胞血型检测常规技术之中。

附1：如何洗涤红细胞 （参考AABB）

1、EDTA抗凝全血2ml，3000 rpm/min，离心5分钟。

2、吸取上层血浆于干净试管中，标记后待用。

3、下层血细胞层加入生理盐水或磷酸盐缓冲液（PBS）5ml，混匀，洗涤（注意操作轻柔，防溶血！），3000rpm/min，离心5分钟。

4、弃去上清液，重复步骤3，3-5次。

5、最后1次离心所得的上清液应澄清，吸取并完全除去上清，即为洗涤后的压积红细胞，备用。

温馨小提示：在日常工作中，我们可能没有那么严格的按照AABB的要求离心5分钟，久保田KA-2200离心机第3档离心力为1000g，时间是1分钟，可用于洗涤红细胞。

附2：如何配制不同浓度的红细胞悬液 

红细胞抗原抗体特异性反应时，产生的凝集与反应物的浓度有关。一定数量的抗体中加入不同数量的红细胞抗原，或者一定数量的红细胞抗原加入不同数量的抗体都可能导致凝集强度的差异。抗原抗体数量只有在一个合适的比例才会发生最强反应。因此，调整合适浓度的红细胞悬液成为增强红细胞抗原抗体反应的关键因素。不同浓度红细胞悬液与商品化抗-A和抗-B效价对比（见表2-1）。

洗涤后的红细胞经重离心后制备成压积红细胞，其红细胞间隙内仍存留少量血浆或生理盐水，因此一般在制备红细胞悬液时可默认压积红细胞间隙中存在10%的介质溶液，计算后可根据表2-2的配制比例配制相应浓度的红细胞悬液。

操作上要求先加生理盐水，后取红细胞！注意观察比较不同浓度红细胞悬液的颜色和密度！也可根据经验使用3%或者4%的商品化试剂红细胞的颜色和细胞扣的大小来做标准对照。

好啦，亲爱的小伙伴们，今日分享就到这里啦。在日常工作中，您经常遇到哪些比较疑惑的问题呢，欢迎在评论区留言告诉我们，我们将与您一起，共同探讨学习。

附3：参考文献 

1、《AABB技术手册》（第20版），主译：桂嵘、陈秉宇、黄远帅、王勇军 

2、《输血人临床输血技术精进班（第一期）实验手册》 

3、《微柱凝胶免疫技术在疑难血型鉴定中的应用》，主编：李凌波、陈维佳

4、《红细胞血清学技术》，主编：沈伟、陈伟、刘凤霞

本文作者：曾群娟，修改审核：高明、杨贺才。本文仅供学术交流，如对某一观点有争议，可评论区留言或后台加小编微信讨论。